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本制品是百奥莱博公司基于比色法开发的，适用于各种动物血清(浆)、组织等样本中性粒细胞的髓过氧化物酶(MPO)含量。

中性白细胞中存在有髓过氧化物酶，每个细胞所含的酶的量是一定的，约占细胞干重的5%，该酶具有使过氧化氢还原的能力，利用这一特点可以分析酶的活力，并定量测定中性白细胞的数目。

通过供氢体邻连茴香胺供氢后生成黄色化合物，在460nm处通过比色测定A产物的生成量，从而推算出MPO的活力及H2O2减少的量和白细胞的数目。

髓过氧化物酶中性粒细胞所特有，即使在有强吞噬作用的世噬细胞中也极少或完全没有这种酶作为中性粒细胞得到标志。其功能为将氯氧化物和氧化氢转变为次氯盐酸。在炎症状态下，它被释入细胞外液，进入循环。此酶参与含LDL的脂类氧化。

• 缓冲应用液配制：贮备液∶双蒸水＝1∶9，按需要量配制，4℃可保存1个月。
  
• 试剂二：临用时每支加缓冲应用液60mL溶解，可以37℃加热溶解，4℃可保存2周。
  
  • 若您所需测的是组织样本，并且除髓过氧化物酶之外，还需测其它项目时，此时每支试剂二粉剂需配成浓缩一倍的溶液，即每支试剂二粉剂加到缓冲应用液30mL中。
• 试剂三：用时1支粉剂倒入1支溶剂中溶解，最好提前一天配制，充分溶解后4℃可保存2周。
  
• 试剂四：天冷时会凝固，用前放入37℃以上的水中摇晃使其溶解至透明后方可应用，室温可保存6个月。
  
• 显色剂的配制：临用时将试剂五粉剂1支加到100mL缓冲应用液中，充分摇匀，待粉剂完全溶解后再加入试剂六0.1mL，充分混匀，配好后的显色剂4℃避光保存（颜色变深红后弃用）。

• 组织样本的MPO测定：
  
  • 样本前处理：准确称取组织重量，以配好的试剂二溶液为匀浆介质，按重量体积比为1︰19加匀浆介质制备成5%的组织匀浆(也可酌情制备成10%的匀浆)，不需要进行离心。（组织匀浆尽量均匀，不要有大块组织存在）
    
    • 若您除做髓过氧化物酶之外，还需测其它指标时，则组织匀浆制备要按下面方法：
      ① 试剂二配制时要浓缩一倍，即每支试剂二粉剂加到30mL缓冲应用液中；
      ② 先用生理盐水为匀浆介质按实验方法学制成浓缩一倍的匀浆，即10%匀浆（脑组织制备成20%匀浆），不要离心，取出部分浓缩一倍匀浆按1︰1比例加入浓缩一倍的试剂二溶液，混匀后再进行测定。
  • 操作表：
    

    成分(mL)	对照管	测定管
    5%组织匀浆	0.18	0.18
    试剂三	0.02	0.02
    充分混匀，37℃水浴15分钟。
    试剂四	0.2	0.2
    双蒸水	3
    显色剂		3
    混匀，37℃水浴30分钟。
    试剂七	0.05	0.05
    混匀，60℃水浴10分钟，取出后立即在460nm处，1cm光径，双蒸水调零，分光光度计测各管吸光度值。

    • 天冷时，反应液会出现凝固状态，吸光度上升，您可以用25～37℃的水浴箱或取一个盛25～37℃热水的烧杯放在比色机旁边，将各待测管依次放入水浴箱或烧杯中1～2分钟，待凝固消失后即可进行比色。
      
    • 混匀时，最好用旋涡混匀器，使液体上下充分混匀，一定要使最下面液体也能旋转到上面，建议不要用尖底的管子做，尤其不可用1.5mL的EP管，因为这样非常难混匀。
  • 计算方法：
    
    • 单位定义：每克组织湿片在37℃的反应体系中H₂O₂被分解1mol为1个酶活力单位。
      
    • 计算公式：
      

      MPO活力 (U/g湿重)	＝	A测定－A对照
      		11.3×W

      • 11.3：斜率的倒数；
        
      • W：样本取样量(g)，且W＝匀浆液浓度(5%或10%)×取样体积(0.18mL)。
• 血清（浆）样本的MPO测定：
  
  • 样本前处理：取血清(浆)与试剂二按1∶1比例稀释，充分混匀。
    
  • 操作表：
    

    成分(mL)	试剂空白 (可以不做)	对照管	测定管
    血清（浆）		0.18	0.18
    试剂三		0.02	0.02
    充分混匀，37℃水浴15分钟
    试剂四	0.2	0.2	0.2
    双蒸水	0.2	3
    显色剂	3		3
    混匀，37℃水浴30分钟。
    试剂七	0.05	0.05	0.05
    混匀，60℃水浴10分钟，取出后立即在460nm处，1cm光径，双蒸水调零，分光光度计测各管吸光度值。

    • 天冷时，反应液会出现凝固状态，吸光度上升，您可以用25～37℃的水浴箱或取一个盛25～37℃热水的烧杯放在比色机旁边，将各待测管依次放入水浴箱或烧杯中1～2分钟，待凝固消失后即可进行比色。
      
    • 混匀时，最好用旋涡混匀器，使液体上下充分混匀（一定要使最下面液体也能旋转到上面，建议不要用尖底的管子做，尤其不可用1.5mL的EP管，因为这样非常难混匀）。
  • 计算方法：
    
    • 单位定义：每升血清（浆）在37℃的反应体系中H₂O₂被分解1mol为1个酶活力单位。
      
    • 计算公式：
      

      MPO活力 (U/L)	＝	A测定－A对照
      		11.3×V样

      
      V_样：取样中所含血清的量(L),V_样＝前处理后血清浓度0.5(mL/mL)×加样量(0.18×10^-3L)